技术概述

我们提供多种分子互作检测技术,包括 SPR、MST、BLI、ITC 和 DSF,可全面表征分子间相互作用的亲和力、动力学参数和热力学性质。

技术原理与特点

  • SPR(表面等离子共振):基于折射率变化实时监测结合过程,获取 ka、kd、KD 动力学参数
  • MST(微量热泳动):基于温度梯度下的分子运动变化,快速测定亲和力,样品消耗少
  • BLI(生物膜干涉):基于光干涉信号变化,高通量筛选,适合抗体筛选
  • ITC(等温滴定量热):直接测定结合热效应,获取 ΔH、ΔS、KD、n 等热力学参数
  • DSF(差示扫描荧光):监测蛋白热变性过程,评估配体对蛋白稳定性的影响(ΔTm)

实验流程

  • 1. 蛋白/配体样品制备与质量检测
  • 2. 固定相偶联或标记(SPR/BLI/MST)
  • 3. 梯度浓度样品制备
  • 4. 结合/解离曲线采集
  • 5. 数据拟合与参数计算
  • 6. 结果分析与报告生成

实验目的

  • 测定分子间结合亲和力(KD)
  • 获取结合动力学参数(ka、kd)
  • 分析热力学性质(ΔH、ΔS)
  • 评估配体对蛋白稳定性的影响

应用领域

  • 先导化合物亲和力排序
  • 抗体筛选与亲和力成熟
  • 靶点验证与机制研究
  • 蛋白-蛋白相互作用研究
SPR检测
BLI检测
MST检测
ITC检测
DSF检测
分子互作
亲和力检测

相关文献解读

SPR 技术在药物发现中的系统应用

表面等离子共振技术是研究分子间相互作用的重要工具,可实时监测结合过程,获取动力学参数。在药物发现中广泛应用于先导化合物优化、ADMET 研究和生物类似药表征。

Anal Chem. 2020;92(1):310-329

MST:快速亲和力测定的理想选择

微量热泳动技术具有样品消耗少、测定速度快、适用范围广等优点,特别适合早期药物筛选阶段的亲和力快速评估。可在复杂缓冲液中直接测定。

Nat Methods. 2010;7(5):355-357

ITC:直接测定热力学参数的金标准

等温滴定量热法是唯一直接测定结合焓变和熵变的技术,无需标记,可全面表征分子间相互作用的热力学性质,为理解结合机制提供关键信息。

Methods Mol Biol. 2019;2049:273-295

DSF 在配体筛选中的应用

差示扫描荧光技术通过监测蛋白热变性温度的变化(ΔTm)来评估配体结合,是一种快速、低成本的配体筛选方法,特别适合片段筛选。

J Biomol Screen. 2014;19(7):1028-1039

文献解读

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